無機焦磷酸酶ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-IP001

產品簡介：

無機焦磷酸酶(Inorganix Pyrophosphatase,PPase)能夠催化一分子焦磷酸鹽轉化為兩分子磷酸鹽離子。PPase 能夠避免核酸擴增實驗中因無機焦磷酸的累積而抑制反應體系。在 mRNA 疫苗制品的生產中會通過添加 PPase 來提高產量。因此，對mRNA 疫苗制品需要進行 PPase 殘留量的檢測。
本試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫檢測(ELISA)法，將 PPase 標準品和待測樣本加入預包被抗 PPase 抗體的酶標板，然后加入稀釋后的生物i素標記的 PPase 檢測抗體，最后加入 Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體-Biotin+SA-HRP 復合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下由無色轉化成藍色并在終止液的作用下最終轉化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的 PPase 的量呈正相關。

檢測范圍: 0.25~16 ng/mL

定量限:0.25 ng/mL

規格：

96T

應用：

適用于生物制品純化工藝過程的優化、中間工藝過程的雜質控制以及終產品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲溫度均為 2~8℃，有效期12個月。

需自行準備的材料

◆酶標儀

◆去離子水

◆恒溫培養箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實驗前準備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復室溫。所有試劑現配現用。

2.1x洗液配制:濃縮洗液平衡至室溫(18~25°C)，不要有結晶。混勻后根據用量，取適量用超純水按 1:19 的比例，將20x洗液稀釋 20 倍，最終得到1x洗液。

3.1x 檢測抗體配制:100x檢測抗體充分溶解后，離心，取適量然后用稀釋液2以1:99 的比例進行稀釋。
4.1x酶結合物配制:500x酶結合物充分溶解后，離心，取適量然后用稀釋液2以1:499 的比例進行稀釋。
5.標準品的制備：

準備8個 1.5mL 離心管，按照標準品濃度依次標記。取一支凍干標準品加入 1mL稀釋液 1，徹i底溶解后靜置 10 分鐘，所得溶液濃度為 64ng/mL。第一個離心管中加入 450μL 稀釋液 1，其余各離心管分別加入 300uL 稀釋液 1，先取 150uL 溶解混勻的 64ng/mL 標準品加入到第一個離心管中充分混勻后即為 16ng/mL，再依次按下圖進行梯度稀釋:

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。

1.試劑準備:提前準備好各種待測試劑、稀釋好的標準品和待測樣本。

2.酶標板條確定:計算待測樣本和標準品所需酶標板條，將酶標條從鋁箔袋取出，剩余的酶標條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。

3.浸泡酶標板:加入 1xWash Buffer(300 μL/孔)浸泡酶標板，靜置 30 秒后棄去孔中液體，拍干酶標板。洗板對試驗結果有重要影響，確保最后一次拍板沒有洗液殘留。

4.樣本孵育:加入標準品和待測樣本，100 μL/孔，確保 15 min 內完成點樣，37℃靜置孵育1h。

5.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300uL/孔)洗板五次，拍干酶標板。

6.檢測抗體孵育:將 1x 檢測抗體加入酶標板中，100 uL/孔，37℃靜置孵育1h。

7.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次，拍干酶標板。

8.酶結合物孵育:將 1x 酶結合物加入酶標板中，100 μL/孔，37℃靜置孵育 40 min。

9.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次，拍干酶標板。
10.顯色:使用前的10 min 將底物液恢復至室溫(18~25°℃)，將底物液TMB加入酶標板中，100 uL/孔，37℃避光孵育 15

mine

11.終止:加入 50 uL/孔終止液至酶標板中，輕輕震動酶標板至顯色均勻。

12.讀值:20 min 內讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值。450nm 作為檢測波長，630nm 作為參比波長。

結果處理

1. 標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）

2. 標準品理論濃度與對應 OD 值以四參數進行擬合，得到標準曲線(如下圖所示)。

注意事項

1.樣品首i次檢測，建議進行至少3個連續倍數的稀釋，以在標準曲線范圍內產生至少一個稀釋后樣品。

2.試劑按標簽說明儲存，使用前室溫(18~25℃℃)平衡。3.包被酶標板使用前，請平衡至室溫(18~25°C)再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其余不用試劑應包裝好或蓋好。

4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要。

6.洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙中上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應孔中吸水。

7.底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。

8.本產品為一次性使用的試劑盒，請在效期內使用。

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