T7 RNA Polymerase ELISA 檢測試劑盒說明（2G）說明書

貨號：HG-TP001-2G

產品簡介：

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫檢測（ELISA）法，將T7 RNA Polymerase標準品和待測樣本加入預包被抗T7 RNA Polymerase抗體的酶標板，然后加入稀釋后的生物i素標記的檢測抗體和Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP復合物，洗板后加入TMB顯色液顯色。TMB在HRP酶的催化下由無色轉化成藍色并在終止液的作用下最終轉化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的T7 RNA Polymerase的量呈正相關。

檢測范圍：0.25 ~ 16 ng/mL
定  量  限：0.25 ng/mL
檢  測  限：0.012 ng/mL
精  密  度：CV% < 10%, RE% < 士15%

規格：

96T

應用：

適用于生物制品純化工藝過程的優化、中間工藝過程的雜質控制以及終產品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:未開封試劑盒，在2~8℃條件下有效期為12個月。

需自行準備的材料

◆酶標儀

◆去離子水

◆微孔板恒溫振蕩器

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實驗前準備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復室溫（18~25°C）。所有試劑現配現用

2.1×洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18~25℃），不要有結晶。混勻后根據用量，取適量去離子水按1：9的比例，將10×洗液稀釋10倍，最終得到1×洗液。

3.1×檢測抗體配制：計算實驗所需工作液體積，取適量100×檢測抗體，用抗體稀釋液按1：99稀釋，充分混勻備用。

4.標準品的配制:取一支標準品，加200 μL去離子水，渦旋混勻，終濃度為160 ng/mL;取60uL濃度為160ng/mL標準液，加至540uL樣品稀釋液，渦旋混勻，終濃度為16ng/mL，用移液器將300uL樣品稀釋液移至每個離心管中，再按照下圖進行1:1梯度梯度稀釋。

5. 樣品使用樣品稀釋液進行稀釋，稀釋后的樣品即為：樣品稀釋工作液。

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫（18~25°C）。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。

1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產生氣泡。

2.根據實驗孔數量，確定所需的板條數目，剩余板條放回鋁箔袋，密封。

3.加樣與檢測抗體工作液:每孔加入100μL標準品、樣品稀釋工作液、陰性對照至相應孔中。每孔加1x檢測抗體50uL。用封板膜封板后置37°C恒溫震蕩培養箱，600-800rpm，溫育60分鐘。

4.洗滌:棄去各孔內液體，用1x洗液注滿微孔(300 uL/孔)，靜置30秒后棄去孔內液體;重復3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。

5.顯色:每孔分別加100 μL底物顯色液，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置25℃℃顯色15分鐘。

6.測定:每孔加終止液100 L，輕微混勻。選擇酶標儀主波長450nm，參考波長630nm，測定各孔吸光值(OD值)。

結果處理

1.標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）

2.標準品理論濃度與對應OD值以四參數進行擬合，得到標準曲線（如下圖所示）。

注意事項

1.樣品首i次檢測，建議進行至少3個連續倍數的稀釋，以在標曲范圍內產生至少一個稀釋后樣品。

2.試劑按標簽說明儲存，使用前室溫平衡。

3.包被酶標板使用前請平衡至室溫再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其他不用的試劑應包裝好或蓋好。

4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑的稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要。

6.洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾放入反應孔中吸水。

7.底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。

8.本產品為一次性使用的試劑盒，請在效期內使用。

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