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產(chǎn)品簡介
Gibco分散酶Dispase II，粉末是一種氨基內(nèi)肽酶，可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白。分散酶 II 具有溫和的蛋白水解作用，可用于原代細胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶 II 相對溫和，在生理溫度和 pH 值條件下具有良好的解離能力，通常可維持細胞膜完整性。
【產(chǎn)品名稱】Gibco分散酶Dispase II，粉末
【產(chǎn)品貨號】17105041
【產(chǎn)品規(guī)格】5 g
【產(chǎn)品狀態(tài)】凍干
【產(chǎn)品類型】細胞培養(yǎng)解離試劑
【產(chǎn)品效期】24個月
【產(chǎn)品運輸】室溫
【產(chǎn)品簡介】Gibco分散酶Dispase II，粉末是一種氨基內(nèi)肽酶，可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白。分散酶 II 具有溫和的蛋白水解作用，可用于原代細胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶 II 相對溫和，在生理溫度和 pH 值條件下具有良好的解離能力，通常可維持細胞膜完整性。Gibco™ 分散酶 II 在多粘芽孢桿菌中生產(chǎn)，包裝形式為凍干非無菌粉末，供細胞或組織解離等研究使用，并防止在懸浮培養(yǎng)中結(jié)團。我們保證 Gibco™ 分散酶 II 的活性大于 0.5 單位/mg。
【產(chǎn)品使用】
重建Dispase
1. 將非無菌酶溶解在Dulbecco 's磷酸緩沖鹽水(DPBS)中，不含鈣和鎂至10 mg/mL。
2. 再用不含鈣和鎂的DPBS稀釋至終濃度0.6-2.4 U/mL。
注意:濃度不建議高于2.4 U/mL。
3.通過0.22µm的過濾膜過濾滅菌。
分離組織
1.用無菌剪刀將組織切成3-4毫米的小塊。
2.在不含鈣和鎂的無菌DPBS中清洗幾次組織片。
3.將組織片段浸入Dispase溶液(0.6-2.4 U/mL)中，37℃孵育。
4.在37°C下緩慢攪拌，直到組織充分溶解。對于致密組織，我們建議孵育1小時。即使經(jīng)過幾個小時的消毒，細胞也不會受到不良影響。
5.如有必要，通過無菌不銹鋼或尼龍網(wǎng)將分散的細胞從殘留組織中分離出來，或者在較大的碎片沉淀后簡單地倒入細胞。如果需要進一步分解，可以向剩余的組織碎片添加新鮮的Dispase溶液。
6.離心使細胞成球，倒入酶溶液。
7.將細胞顆粒重新懸浮在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中。使用伯爵夫人®自動細胞計數(shù)器確定活細胞密度(可使用自動或手動替代方法)。
8.將細胞植入含有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，在預(yù)定條件下進行培養(yǎng)。
注:通過將濃度為0.3-0.6 U/mL的disase與膠原酶(60-100 U/mL)混合，可以更有效地分離組織。
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