jetPRIME簡(jiǎn)介

jetPRIME®是 Polyplus 公司推出的一款新型的，基于陽(yáng)離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑。可以有效的確保 DNA 和 siRNA 在哺乳細(xì)胞體內(nèi)的高效率、可重復(fù)的轉(zhuǎn)染。

jetPRIME®在多種細(xì)胞系上轉(zhuǎn)染效率都非常有效，可有效的轉(zhuǎn)染多種核酸類(lèi)型，包括 DNA, siRNA，shRNA plasmid 等，并且可以用于 DNA 和 siRNA 共轉(zhuǎn)染。

這款試劑單次轉(zhuǎn)染使用極少量的核酸，從而降低細(xì)胞毒性。關(guān)于 siRNA 轉(zhuǎn)染，DNA/siRNA 共轉(zhuǎn)染的操作說(shuō)明，請(qǐng)咨詢(xún)產(chǎn)品技術(shù)支持。

DNA瞬轉(zhuǎn)操作步驟

一、細(xì)胞接種

建議轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞融合度為 60-80%。

舉例：基于 6 孔板的操作，轉(zhuǎn)染前 24 小時(shí)，接種 200，000 個(gè)細(xì)胞，2mL 細(xì)胞懸液。

其他培養(yǎng)條件，請(qǐng)參考表 1. jetPRIME® 在血清和抗生素的條件下非常穩(wěn)定，因此，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)可以在有血清和抗生素的條件下進(jìn)行。

表 1. 轉(zhuǎn)染前建議的細(xì)胞接種量

二、DNA轉(zhuǎn)染操作

以下操作為在 6 孔板中的操作條件。其他培養(yǎng)條件，請(qǐng)參考表 2.

1. 將 2ug DNA 加入到 200uL 的 jetPRIME® 緩沖液中（產(chǎn)品附帶）。使用渦旋輕輕混勻。

2. 加入 4uL jetPRIME®，渦旋混勻 10s 并順離。 

3. 室溫下孵育 10 min. 

4. 將 200uL 的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到含有血清的細(xì)胞中。

5. 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)器皿以使轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻的分布到細(xì)胞中。 

6. 如需，轉(zhuǎn)染后 4 小時(shí)可以進(jìn)行更換為wan全培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)。 

7. 轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后或根據(jù)經(jīng)驗(yàn)分析結(jié)果。

表 2. DNA 轉(zhuǎn)染參照表

標(biāo)準(zhǔn)條件：DNA:jetPRIME=1:2(W/V)，即1ug DNA使用 2ul jetPRIME

注意：請(qǐng)使用jetPRIME緩沖液來(lái)稀釋DNA

注意事項(xiàng)

1.細(xì)胞復(fù)蘇后傳代 2-3 代再進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。

2.轉(zhuǎn)染時(shí)確保細(xì)胞狀態(tài)好，細(xì)胞融合度為 60-80%。如細(xì)胞狀態(tài)差，融合度過(guò)高或過(guò)低，則建議重新接種細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。 

3. 稀釋 DNA 時(shí)請(qǐng)使用產(chǎn)品中附帶的 jetPRIME®緩沖液，不要使用 Opti-MEM。

4. 稀釋 DNA 以及加入 jetPRIME®轉(zhuǎn)染試劑后請(qǐng)立即渦旋混勻；如無(wú)渦旋儀，可上下顛倒離心管 4-5 次確保混勻。

5. 復(fù)合物孵育時(shí)間控制在 10 分鐘左右。

6. jetPRIME®轉(zhuǎn)染試劑可兼容血清和抗生素，轉(zhuǎn)染前后可不用換液。如細(xì)胞屬于敏感細(xì)胞，則轉(zhuǎn)染后 4 小時(shí)可換液處理。

疑難解答

一、DNA 轉(zhuǎn)染效率低可能的因素和改進(jìn)措施 

1.優(yōu)化 DNA 和 jetPRIME®轉(zhuǎn)染試劑用量。如細(xì)胞狀態(tài)好，首先考慮增加 jetPRIME®轉(zhuǎn)染試劑用量。如轉(zhuǎn)染效率未明顯提高，則增加 DNA 用量。 

2. 確保轉(zhuǎn)染操作時(shí)細(xì)胞在含有血清的條件下培養(yǎng)。缺乏血清時(shí)，細(xì)胞狀態(tài)不佳，則轉(zhuǎn)染會(huì)受影響。 

3. 確保使用 jetPRIME®緩沖液來(lái)稀釋核酸。

4. 使用帶有報(bào)告基因的質(zhì)粒，例如有熒光素酶或 GFP 標(biāo)記的陽(yáng)性對(duì)照。 

5. 質(zhì)粒的濃度建議在 0.3-1 ug/uL。 

6. 如細(xì)胞為已知的難轉(zhuǎn)染細(xì)胞，則起始 DNA 用量增加到表 2 中建議的 1.5 倍。如觀察到細(xì)胞毒性，則降低 DNA 用量。 

7. 使用高質(zhì)量的質(zhì)粒，需要去除內(nèi)毒素，不含蛋白或 RNA (OD260/280>1.8)。

二、細(xì)胞毒性大可能的因素和改進(jìn)措施

1.轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。 

2. 轉(zhuǎn)染后 4 小時(shí)換液。

3. 確保使用 jetPRIME®緩沖液來(lái)稀釋核酸。 

4. 減少 jetPRIME®轉(zhuǎn)染試劑用量。 

5. 確保質(zhì)粒無(wú)內(nèi)毒素。 

6. 驗(yàn)證質(zhì)粒對(duì)應(yīng)蛋白的毒性。如果蛋白對(duì)細(xì)胞有毒性，則降低 DNA 用量